尊龙凯时人生就博猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法）使用说明书

产品概述

本试剂盒的通用名称为猪蓝耳荧光PCR检测试剂盒（实时荧光PCR法），英文名称为Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus Detection Kit (Real-Time PCR Method)。包装规格为50T/盒。

预期用途

该试剂盒采用实时荧光PCR原理，能够定性检测猪蓝耳病病毒，为猪蓝耳病的诊断和疗效评估提供重要指导。

原理

本试剂盒针对猪蓝耳病病毒的高度保守区域设计了特异性引物和探针。只有在反应体系中含有猪蓝耳病病毒基因组模板的情况下，PCR反应才会进行并释放荧光信号。通过荧光定量PCR仪实时监测和输出PCR过程中相应通道的信号，从而实现检测结果的定性分析。

试剂盒组成

本试剂盒分为以下几部分：

• PRRSV RT-PCR反应液：875 μL × 1管
• PRRSV混合酶液：125 μL × 1管
• PRRSV阳性对照：40 μL × 1管
• PRRSV阴性对照：40 μL × 1管
• 说明书：1份

注意：阴性对照为灭菌纯水，阳性对照为含猪蓝耳靶基因的质粒。

储存条件及有效期

本试剂盒需避光保存于-20℃以下，避免反复冻融，有效期为12个月。

适用仪器

适用的PCR仪器包括：ABI系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列及杭州博日系列等多通道实时荧光定量PCR仪。

样本要求

样本的准备需要符合以下要求：

1. 血液或血清样品：使用无菌注射液抽取样品，置于离心管中待检。
2. 肺脏、淋巴结和脾脏样品：取样本20g，加少量灭菌PBS，用无菌研磨器研磨至糊状，再用4倍体积的PBS稀释成乳剂，8000rpm 4℃离心10分钟，取上清待检。
3. 避免标本间交叉污染。
4. 收集后可立即检测；如不能立即检测，可置于2～8℃冷藏过夜保存；如需长期保存，样本需冻存于-80℃以下，避免反复冻融。

检验方法

检验方法包括下列步骤：

1. 试剂准备

从冰箱中取出试剂盒，除去实验所需试剂后充分融化混匀，并瞬时离心以去除管壁附着的液体。根据实验需要计算反应数，并配置所需试剂量。

2. 样本处理

使用QIAGEN或Roche公司的RNA提取试剂盒提取RNA，具体操作按照相应说明书进行。

3. 加样

在PCR反应样本管中加入待测样本RNA，阳性及阴性对照品分别添加至PCR反应管中，均需瞬时低速离心后转移至PCR仪器。

4. PCR扩增

将准备好的PCR反应管放置于实时荧光定量PCR仪样品槽，并记录顺序，设置相关参数进行PCR扩增。

检验结果的解读

对检测结果进行解读时需遵循下列标准：

• 阳性对照应有典型的扩增曲线，Ct值≤35；
• 阴性对照Ct值应大于38或无Ct值，无指数增长期；
• 标本检测Ct值≤35为阳性，35≤Ct值≤38为可疑，Ct值>38为阴性。

注意事项

尊龙凯时人生就博提醒用户，实验室应遵循基因扩增检验实验室管理规范，避免RNA降解，确保样本处理过程在低温下进行，及定期对工作区域进行消毒。使用过程中应特别注意避免交叉污染。

通过掌握这些知识，您将能够更好地使用本试剂盒进行猪蓝耳病的检测与研究，加强生物医疗领域的科研工作。